miRNA表达克隆 技术服务

MicroRNA (miRNA)是从真核基因组转录形成的非编码单链小分子RNA。它们的序列高度保守,通常是21到23个核苷酸长度。近来研究发现miRNA几乎与所有细胞的功能和生物体生命过程有关。它们通过靶定到mRNA3’非翻译区(3'-UTR)来调节基因的表达。MicroRNA所调节基因的表达失调与癌症、心血管疾病、其他各种疾病有关。

百细生物现在提供:
1048条人源、672条小鼠源、408条大鼠源miRNA插入各种表达载体中构建的miExpress™ microRNA前体表达克隆。
miRNA靶标的表达克隆编码基因的3’端非翻译区(3’-UTR)涵盖了人类编码基因20000个miRNA靶标表达克隆。(3’-UTR,即编码基因的3’端非翻译区)
利用这些miRNA表达克隆研究相应基因或者蛋白的表达调节情况。配合采用荧光素酶报告基因的靶标克隆,可以和miRNA表达克隆一起进行miRNA功能筛选合确证,以及miRNA靶标基因的筛选和确证的交互实验。

百细生物同时也提供多套的人类基因组和小鼠基因组的全长基因ORF表达克隆。用于miRNA靶标的对应蛋白的功能互补实验。由于这些ORF克隆不含3’-UTR,可以用于特种miRNA对内源靶基因抑制后的拯救实验,进一步确证miRNA功能及靶标基因。

miExpress™人类基因组的miRNA前体表达克隆
百细生物采用基于猫免疫缺陷病的慢病毒系统,构建了miRNA前体表达克隆的载体骨架。RNA聚合酶III型的H1启动子驱动转录前体miRNA的茎环前体(大约有150核苷酸长度)。 随后通过RNAi的酶系加工生成成熟的miRNA。使得在同一载体的CMV启动子的驱动下共表达报告基因eGFP,双顺反子下游的新霉素筛选基因也同时表达。可作为监测miRNA表达,转染和转化的效率的参考标准。

RISC-miRNA复合体通过结合靶基因的mRNA的3’非编码区(3’-UTR)成功地调节靶基因。1)表达水平和翻译水平的抑制;2)mRNA的被切割,被降解和丰度的下降。

 

分子生物学 服务

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